種屬

人

測(cè)試酶系

CYP450酶：CYP1A2、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6和3A等

UGT酶：UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A9、2B7和2B15等

SULT酶：SULT1A1、1A2、1A3、1B1、1E1和2A1等

CES酶：CES1和CES2

其他：AADAC、FMO等其他酶或亞型可應(yīng)要求提供

供試品測(cè)試濃度

5~7個(gè)，根據(jù)已知的藥效和毒性數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)

探針底物濃度

1個(gè)或1-5個(gè)（直接抑制常數(shù)測(cè)定），根據(jù)探針底物Km值設(shè)計(jì)

孵育體系蛋白濃度

亞細(xì)胞組分：0.1-1 mg/mL（可根據(jù)要求提供不同的濃度）

細(xì)胞組分：0.1-2×10⁶ cells/mL

基因重組酶體系：250 - 500 pmol/mL 或0.1-1 mg/mL

孵育時(shí)間

直接抑制或TDI IC₅₀ shift：一個(gè)預(yù)孵育時(shí)間點(diǎn)，一個(gè)孵育時(shí)間點(diǎn)

TDI KI和Kinact測(cè)定：預(yù)孵育2-5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，一個(gè)正式孵育時(shí)間點(diǎn)

根據(jù)不同要求提供

輔酶因子

NADPH或UDPGA（其他輔酶因子可根據(jù)要求提供）

分析方法

LC-MS/MS

數(shù)據(jù)呈現(xiàn)

探針底物代謝產(chǎn)物相對(duì)生成量

相對(duì)活性（% of NC）

半數(shù)抑制濃度（IC₅₀）

抑制活性（%）

IC₅₀偏移

抑制常數(shù)（Ki）

最大失活速率常數(shù)（Kinact）

導(dǎo)致半數(shù)最大失活的游離抑制劑濃度（KI）